谷類豆類基質(zhì)多真菌毒素LC-MS/MS分析方法

更新時間：2022-11-15

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步驟	GB 5009.111-2016 傳統(tǒng)SPE柱法凈化（嘔吐毒素）	GB 5009.22-2016 黃曲霉毒素免疫親和柱	GB 5009.96-2016 赭曲霉毒素A免疫親和柱法	FaTEx 多真菌毒素專用SPE柱法
1	稱取2g樣品，于50mL離心管中	稱取5g樣品，于50mL離心管中	稱取25g樣品，加入5g氯化鈉	1、稱取2g樣品，于50mL離心管中
2	加內(nèi)標溶液，靜置30min	加內(nèi)標溶液，靜置30min	用提取液Ⅰ定容到100mL，混勻	2、加入 12mL 70%酸化乙腈溶液
3	加入20mL乙腈-水溶液，渦旋混勻	加入20mL乙腈-水溶液，渦旋混勻	高速均質(zhì)2min	3、高速振蕩30min
4	超聲或渦旋振蕩20min	超聲或渦旋振蕩20min	用定性濾紙過濾	4、離心5min，取5mL上清液到FaTEx SPE柱內(nèi)
5	離心5min，取5mL上清液	離心10min，取4mL上清液	移取10mL濾液于50mL容量瓶	5、以每秒1滴過柱，收集濾液
6	加入10mL乙腈飽和正己烷溶液	加入46mL 1% Trition X-100的PBS，混勻得到樣液	加水定容至刻度，混勻	6、取1.2mL濾液濃縮至近干
7	渦旋2min	將低溫保存的免疫親和柱恢復至室溫，將原有液體流盡	經(jīng)玻璃纖維濾紙過濾澄清，收集濾液A于容器	7、以1mL50%乙腈-水溶液回溶
8	離心2min，棄去正己烷層	將上述樣液以1-3mL/min的速度通過免疫親和柱	移取10mL濾液A，以每秒1滴通過免疫親和柱	8、過濾膜，上機到LC-MS/MS分析
9	氮吹近干，加入4mL水復溶為溶液A	用20mL水淋洗免疫親和柱	用10mLPBS緩沖液通過親合柱
10	用3mL甲醇和3mL水活化平衡SPE柱	水滴完后，抽干親和柱	用10mL水淋洗親和柱
11	將4mL溶液A上柱，每秒1-2滴	加入2mL甲醇洗脫親和柱，1-3mL/min的速度	棄去流出液，抽干親和柱
12	用3mL誰淋洗SPE柱	再次抽干親和柱	以5mL甲醇洗脫2次，收集洗脫液
13	用1mL5%甲醇-水溶液淋洗SPE柱	收集全部洗脫液到試管中，氮吹至近干	氮吹近干
14	抽干SPE柱，用4mL甲醇洗脫	用1mL初始流動相復溶	以1mL乙腈-水溶液復溶
15	收集全部洗脫液后，氮吹近干	過濾膜，上機到LC-MS/MS分析	過濾膜，上機到LC-MS/MS分析
16	用1mL初始流動相復溶
17	過濾膜，上機到LC-MS/MS分析
小結	GB 5009.111-2016 傳統(tǒng)SPE柱法凈化（嘔吐毒素）	GB 5009.22-2016 黃曲霉毒素免疫親和柱	GB 5009.96-2016 赭曲霉毒素A 免疫親和柱法	FaTEx 多真菌毒素專用SPE柱法
目標物	嘔吐毒素（1種）	黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2（4種）	赭曲霉毒素A（1種）	黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2，赭曲霉毒素A，嘔吐毒素，玉米赤霉烯酮，伏馬毒素B1、B2，T-2毒素，HT-2毒素（11種）
基質(zhì) 類型	谷類及制品、醬及制品	谷類及制品、豆類及制品、堅果及籽、油脂及制品、調(diào)味品等	玉米、小麥等糧食	谷類、米類、玉米、花生、花生醬
前處理	傳統(tǒng)嘔吐毒素SPE柱法凈化法 1、一次凈化測試 1種毒素 2、液液萃取操作，多做一次溶劑轉換 3、傳統(tǒng)SPE柱需要活化、淋洗和洗脫	免疫親和柱法前處理 1、一次凈化測試 4種毒素 2、低溫儲運，恢復常溫后使用 3、需要淋洗、抽干和洗脫	免疫親和柱法前處理 1、一次凈化測試 1種毒素 2、低溫儲運，恢復常溫后使用 3、需要淋洗、抽干和洗脫	FaTEx 真菌毒素專用SPE柱 1、一次凈化測試 11種毒素（包括但不限于） 2、常溫使用 3、操作步驟簡化
效率	5-6小時/每批20個樣品	4小時/每批20個樣品	4小時/每批20個樣品	1小時/每批20個樣品
參考資料：
1、GB 5009.111-2016 食品安全國家標準食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙?；苌锏臏y定
2、GB 5009.22-2016 食品安全國家標準食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定
3、GB 5009.96-2016 食品安全國家標準食品中赭曲霉毒素A的測定
4、以FaTEx-gen快速凈化萃取套組搭配液相層析串聯(lián)質(zhì)譜分析谷類樣體中之多重霉菌毒素應用方案

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